تأثير الأحماض العضوية أو البروبيوتيك وحدها أو في تركيبة على أداء النمو، هضم المغذيات، وأنشطة الإنزيم، مورفولوجيا الأمعاء والبكتيريا الأمعاء في الدجاج الفراري

2.1 نموّ أداء

تم وزن ما مجموعه 1440 فراخ مباة عمرها يوم واحد (Ross308) بشكل فردي وتم تعيينها عشوائيًا في أربع مجموعات. وتحتوي كل مجموعة على خمس نسخ متماثلة، مع 72 فراخ لكل تكرار (36 ذكراً و36 أنثى). تمت تربية الفراخ على مرحلتين (مرحلة البداية، أيام 0-21 ومرحلة المزارع، أيام 22-35). وقد صيغ تكوين المغذيات لكل من مرحلتي البداية والمزارعين ليكون مماثلاً لمتطلبات الطيور وفقاً لتوصيات المجلس النرويجي للاجئين (1994) كما هو مبين في الجدول 1. تم استكمال هذا النظام الغذائي التحكم (CD) مع 2 غرام / كجم الأحماض العضوية (CDOA، 1 كجم تحتوي على 320 غرام حمض الفوماريك، 30 غرام حمض الفورميك، 130 غرام حمض اللاكتيك، 30 غرام حمض بروبيوني و 10 غرام حمض الستريك)، 2 غرام / كغ البروبيوتيك (CDP، 1 كجم تحتوي على 30 غرام جراثيم عصيات, عصيات العد ^≥ 5 × 1011 CFU/kg, 620 غرام منتجات التخمير المجففة ووسائل الإعلام الغذائية, 347 غرام كبريتات الصوديوم و 3 ز عامل anticaking) أو مزيجمن (CDOAP, 2 غرام / كغ الأحماض العضوية و 2 غرام / كغ البروبيوتيك). تمت تربية الفراخ لكل من مرحلتي البداية والمزارع في نظام مفتوح وتغذية libitum الإعلاني مع القرص المضغوط القاعدي أو الوجبات الغذائية التجريبية. كانت مياه الشرب متاحة للليبيتوم الإعلاني طوال التجربة. تغذية الكتاكيت إما القرص المضغوط أو الوجبات الغذائية التجريبية وزنها 21 و 35 يوما بعد بدء التجربة. تم تسجيل مدخول الأعلاف (FI) وزيادة وزن الجسم (BWG) واستخدامها لحساب FCR لكل فرخ. وللكفاءة الاقتصادية، تم أيضا تقييم تكلفة الأعلاف وتكلفة الإنتاج وإجمالي تكلفة التغذية للوجبات الغذائية التجريبية. تم تسجيل معدل وفيات الفراخ طوال التجربة ، وكانت جميع العلاجات متشابهة وكان لها بقاء 98.35 ٪ (في المتوسط) في نهاية الفترة التي تمت دراستها. تم استعراض جميع البروتوكولات التجريبية التي تصف إدارة الحيوانات ورعايتها في هذه الدراسة والموافقة عليها من قبل لجنة رعاية الحيوانات واستخدامها التابعة لمعهد الحيوانات لتنمية الأغراض العلمية، المجلس الوطني للبحوث في تايلاند (القانون U1-01783-2558).

2.2 هضم المغذيات

في اليوم 35، تم اختبار ما مجموعه 20 فراخ ذكر مع أوزان مماثلة في الجسم لقياس هضم علاجاتهم الغذائية (ن = 5 لكل علاج). تم تعيين جميع الكتاكيت بشكل عشوائي في أقفاص التمثيل الغذائي الفردية (عرض 40 سم × 40 سم طول × 45 سم الارتفاع). تم تخصيص العلاجات الغذائية في مرحلة المزارعين الأربعة بشكل عشوائي للأقفاص الفردية لفترة إجمالية قدرها 8 أيام ، تتكون من 5 أيام من تأقلم النظام الغذائي تليها 3 أيام تم خلالها قياس هضم الأعلاف. خلال الأيام من 40 إلى 42 ، تم جمع جميع الإفرازات من كل قفص وتم قياس إجمالي FI لكل قفص على حدة. تم جمع الفضلات من الأقفاص الأيضية ، التي تم وزنها بشكل منفصل كل يوم خلال فترة جمع العينات ، في صواني بلاستيكية وتخزينها في ثلاجة عميقة حتى تصبح مطلوبة للتحليل (Kirkpinar ، Açikgöz ، Bozkurt ، و Ayhan ، 2004). وفي نهاية فترة التجميع التي استغرقت ثلاثة أيام، كانت الفضلات من كل عملية تكرار مختلطة، ثم أخذت عينات أرضية وتمثيلية لتحديد التركيب القريب وفقا لأساليب AOAC (2000). وحددت الإجراءات المستخدمة في تحديد المواد الجافة والمغذيات وفقا للأساليب التي وصفها بانيرجي (1978).

2.3 استخراج الإنزيم الهضمي

تم استخدام نفس العينة الكتاكيت من دراسات الهضم لالفحص نشاط الإنزيم الهضمي (ن = 5 لكل علاج) في سن 42 يومًا. تم التضحية بكل طائر بسبب خلع عنق الرحم ، وتم تشريح الفرينمنت من الفراخ. تمت إزالة المقاطع المعوية بعناية، وتحديدها وتشريحها على الجليد على النحو التالي: الاثني عشر (مقسمة من gizzard إلى القنوات البيلية pancreo)، jejunum (مقسمة من القنوات pancreo-biliary إلى diverticulum Meckel) وileum (مقسمة من diverticulum Meckel إلى تقاطع ileo-caecal). لاستخراج إنزيمات الجهاز الهضمي المشوي وقياس تركيز البروتين، تم وزن البروفتريكولي المجمدة والأمعاء (بما في ذلك الاثني عشر، jejunum وileum) ، مقطعة إلى قطع صغيرة ثم متجانسة في 0.2 M الفوسفات الحاجز درجة الحموضة 7 (1:5 ث / في)، وذلك باستخدام microhomogenizer (THP–220؛ أومني إنترناشيونال، كينيساو، الجمعية العامة، الولايات المتحدة الأمريكية). تم طرد المتجانس في 13000 × غرام، عند 4 درجات مئوية لمدة 20 دقيقة، وتم إعداد العليوات التي تم الاحتفاظ بها عند -20 درجة مئوية حتى الاستخدام. تمت مقارنة تركيز البروتين من مستخلص إنزيم خام إلى منحنى قياسي من ألبوم مصل البقري (BSA)، ضمن نطاق خطي، وفقا للطريقة القياسية للوري، روزنبرو، فار، وراندال (1951).

2.4 الأنزيم الهضمي المقالات

تم استخدام مستخلص بروفنتريكولوس فقط لمراعاة نشاط البيبسين (EC 3.4.23.1) في حين تم استخدام ثلاثة مستخلصات معوية للتقليل من أنشطة التربسين (EC 3.4.21.4) ، قياس القُمو Psin (EC 3.4.21.1) ، α-الأميليز (EC 3.2.1.1) ، cellulase (EC 3.1.1.4) والليباز (EC 3.1.1.3). وأجريت جميع التحليلات عند درجة حرارة 37 درجة مئوية مع درجة الحموضة المفضلة على النحو المبين في التقارير السابقة (غابرييل، ماليه، ولوكونت، 2003؛ غلهككاندي وآخرون، 2011؛ جانغ، كو، كانغ، ولي، 2007؛ محمود، خان، سروار، نيسا، 2008؛ شين، هان، جي، كيم، ولي، 2008). تم اسيد نشاط البيبسين باستخدام الكيسين كركيزة ، وفقًا لطريقة Rungruangsak و Utne (1981). تم استخدام معيار L-التيروسين ضد امتصاص المنتج المحرر في 720 نانومتر. وكانت أنشطة التربسين وchymotrypsin assayed باستخدام N-benzoyl-L-Arg-p-nitroanilide و N-succinyl-Ala-Ala-Pro-Phe-p-nitroanilide كركائز، على التوالي، وفقا للطريقة التي وصفها رونغرانجساك-توريسن، موس، أندريسن، بيرغ، وواغبو (2006). تم اتخاذ تحديد اللون من ف نيتروانيلدي في 410 نانومتر ضد المنتج المحرر. تم تحديد أنشطة α-amylase وcellulase باستخدام النشا القابل للذوبان وcarboxymethylcellulose كركائز ، وفقًا لطريقة Areekijseree وآخرون. (2004) ومندلس وفيبر (1969) على التوالي. تم قياس تركيز المنتجات كميا مقابل المالتوز القياسية والجلوكوز، على التوالي، في 540 نانومتر. تم تحديد نشاط ليباز وفقًا لطريقة وينكلر وستوكمان (1979) باستخدام p–nitrophenyl palmitate كركيزة. تم قياس الكشف عن الألوان في 410 نانومتر مقابل النطاق الخطي القياسي للنيتروفينول ف.

2.5 الخصائص الحرارية إفراز

تم رصد العناصر القابلة للهضم (درجة حرارة منخفضة) وغير قابلة للهضم (درجة حرارة عالية) بعد الهضم والامتصاص من خلال الخصائص الحرارية للإفراز (Kanghae et al., 2017; واتناكول، ثونغبراغاجو، سونغنوي، ساتخاراك، وكانغاي، 2017). تم جمع إفراز شواية طازجة (n = 5 لكل علاج) من الصواني خلال الأيام ال3 الأخيرة قبل نهاية التجربة. تم تحديد الخصائص الحرارية للإفراز وفقًا للطريقة التي وصفها واتاناكول وآخرون. (2017) مع تعديلات طفيفة. تم وضع عينة من ثلاثة ملليغرام في مقلاة من الألومنيوم، مختومة، وسمح لها بالاعتدال في درجة حرارة الغرفة ثم تسخينها من 20 إلى 500 درجة مئوية بمعدل 10 درجة مئوية/دقيقة، مقابل مقلاة مرجعية فارغة. تم تحديد المعلمات الحرارية، من حيث البداية (إل_ى)، الذروة ₍Tp) ودرجات الحرارة (_Tc) وenthalpy (ΟH)، باستخدام مقياس السعرات الحرارية المسح الضوئي التفاضلي (DSC7؛ بيركين إلمر، والثام، ماجستير، الولايات المتحدة الأمريكية).

2.6 علم التشريح المعوي والبكتيريا الهضمية التهم

وفي اليوم 35، تم اختيار ما مجموعه 80 فراخ تتكون من 20 فراخ (10 ذكور و 10 إناث) لكل علاج بشكل عشوائي. تم التضحية بالفراخ بسبب خلع عنق الرحم، وتم جمع جزء عشري بطول 2 سم من كل الأمعاء الدقيقة، وإصلاحه في سائل بوين، وتجفيفه بتسلسل الكحول التولوين القياسي، وجزءاً لا يتجزأ من شمع البارافين. تم إعداد شرائح خمسة ميكرومتر وملطخة بالهيماتوكسيلين والإيوسين. تم قياس الزغب المعوي مع سراديب Lieberkühn من كل شريحة بشكل فردي في 70 حقلًا مجهريًا باستخدام نظام تحليل الصور. كما حُسبت نسبة ارتفاع الفيلوس إلى عمق سرداب لكل شريحة (Santin et al., 2001).

تم جمع عينات Digesta من الإيليوم والكاكوم. تمت إزالة الكائنات الدقيقة الملوثة عن طريق غمر عينة السطح في 70:100 (v/v) الإيثانول، ثم غمرها في الماء المقطر المعقم لمدة 30 ق (Ghanbari، رضائي، جامي، ونزاري، 2009). تم تعليق العينات (1:10 ث / v) في محلول محلول ملاخطعادي عادي (0.85:100 ث / v) وتم تجانسها على خلاط مختبر Stomacher لمدة دقيقة واحدة ثم 10 أضعاف مخففة بشكل متسلسل. تم مطلي 100 ميكرولتر من التخفيف على إيوسين ميثيلين الأزرق أجار (EMB) وكذلك Lactobacilli MRS Agar (MRS). تم احتضان لوحات الإدارة الانتخابية في 37°C لمدة 18 ساعة. تم احتضان MRS agar في 37°C لمدة 48 ساعة تحت شرط اللاهوائية. تم عد البكتيريا اللاكتوباكيلي والقولونية باستخدام عداد مستعمرة. تم التعبير عن النتائج على أنها log10 _من وحدات تشكيل المستعمرة (CFU) لكل غرام من المحتوى.

2-7 التحليل الإحصائي

وقد تم تحليل جميع البيانات التي تم الحصول عليها في تصميم معشا تماما باستخدام إجراء PROC UNIVARIATE (SAS 2015 الإصدار 9.4; معهد SAS، كاري، NC، الولايات المتحدة الأمريكية. وأجريت التحليلات الإحصائية باستخدام ANOVA أحادية الاتجاه لجميع النتائج. تم تحليل آثار المكملات الغذائية على أنشطة الإنزيم الهضمي في أجزاء مختلفة من الجهاز الهضمي باستخدام ANOVA في اتجاهين مع العلاج وشرائح الأمعاء وتفاعلاتها كعوامل. تم فصل الوسائل من قبل اختبار دنكان متعدد المدى (دنكان، 1955). وقد أُعرب عن التباين في البيانات على أنه الخطأ القياسي المجمع، واعتُبرت النتائج ذات أهمية إحصائية حيثما كان p< .05.

3.1 نموّ أداء وفعالية اقتصاديّة

لم تكن هناك اختلافات كبيرة (أي p >.05) استنادًا إلى العلاجات الغذائية في أداء النمو خلال مرحلة البدء أو مرحلة المزارعين (الجدول 2). لا الأحماض العضوية ولا البروبيوتيك وحدها ولا مزيجها أثرت FI, BWG و FCR, وكانت غالبية البيانات مماثلة لجميع العلاجات. ومع ذلك ، خلال مرحلة البداية (الأيام 0-21) ، أظهرت الكتاكيت التي تتغذى على CDOA و CDP و CDOAP أعلى قليلاً من BWG و FCR من تلك التي يتم تغذيتها على القرص المضغوط على الرغم من أن الفرق لم يكن كبيرًا (p > .05). كان FC و FCP و TFC من الوجبات الغذائية التجريبية عالية نسبيًا في علاجات CDOAP و CDP تليها CDOA ، نسبة إلى القرص المضغوط (الجدول 2).

3.2 هضم المغذيات

لم تختلف معاملات الهضم للمادة الجافة والبروتين الخام واستخراج الأثير والرماد ومستخلص النيتروجين بشكل كبير في الفراخ التي تتغذى على علاجات مختلفة (p > .05، الجدول 3). ومع ذلك، فإن هضم الألياف الخام في الكتاكيت التي تتغذى على CDOA و CDOAP أظهرت هضم ألياف أعلى بكثير من تلك الموجودة في الكتاكيت تغذية القرص المضغوط (p< .05) for the period from 35 to 42 days.

3.3 أنشطة محددة من الإنزيمات الهضمية

مكملات مع البروبيوتيك أو الأحماض العضوية وحدها أو في تركيبة لم يكن لها أي تأثير على الأنشطة المحددة لأي من الإنزيمات الملاحظة ولا على نشاط معين من الأميليز لالتربسين, نسبة A /T (الجدول 4). وكانت الأنشطة المحددة من التربسين، chymotrypsin والأميليز أعلى في الاثني عشر تليها jejunum وileum. ولوحظ الاتجاه العكسي للخلية، التي كان أعلى نشاط محدد لها في الإيليوم. لم تكن هناك اختلافات كبيرة (p >.05) في النشاط الخاص بالليباز ولا في نسبة A / T عبر الأجزاء المعوية الثلاثة. استنادا إلى ANOVA في اتجاهين، لم يكن هناك أي تأثير على نسبة A / T أو أنشطة الإنزيم الهضمي من المكملات الغذائية وحدها ولا في تركيبة مع الجزء المعوي الذي تم أخذ القياس، في حين أن شرائح الأمعاء وحدها كان كبيرا (ع< .05) effects on all the observed enzymes, except for lipase and the A/T ratio.

3.4 الخصائص الحرارية للإفراز

لم تتأثر الخصائص الحرارية للمغذيات المتاحة الموجودة في البراز ، من _حيث To و T_{p و} Tc و Tc -To و ΟH ، بمكملات غذائية مع البروبيوتيك أو الأحماض العضوية وحدها أو في تركيبة (الجدول 5).