الجزائر : مرض بريون في الإبل الدرودية.

الجزائر : مرض بريون في الإبل الدرودية.

البحوث

مرض بريون في الإبل الدرودية، الجزائر

 

مجرده

البريونس تسبب الأمراض العصبية القاتلة والقابلة للتبديل، بما في ذلك مرض كروتزفيلد جاكوب في البشر، وكشط في المجترات الصغيرة، واعتلال الدماغ الإسفنجي البقري (BSE). وبعد أن بدأ وباء التهابات البحر المتوسط، وما يرتبط به من إصابات بشرية، في عام 1996 في المملكة المتحدة، أثيرت شواغل عامة بشأن البريونات الحيوانية. اكتشفنا مرض بريون في الإبل الدرودية (Camelus dromedarius) في الجزائر. ظهرت أعراض تشير إلى حدوث مرض البريون في 3.1٪ من الدروماديات التي تم جلبها للذبح إلى مسلخ ورقلة في الفترة 2015-2016. أكدنا التشخيص عن طريق الكشف عن التنكس العصبي للباثوغنومونات وبروتين البريون الخاص بالأمراض (PrPSc) في أنسجة الدماغ من 3 الحيوانات ذات الأعراض. الكشف عن بريون في الأنسجة اللمفاوية هو موحية من الطبيعة المعدية للمرض. أظهر توصيف PrPSc البيوكيميائية اختلافات مع BSE وscrapie. ويتطلب تحديدنا لهذا المرض البريون في أنواع من الماشية المنتشرة جغرافيا إنفاذا عاجلا للمراقبة وتقييم المخاطر المحتملة على صحة الإنسان والحيوان.

البريونهي مسؤولة عن مجموعة من الأمراض العصبية القاتلة والقابلة للتبديل المسماة أمراض البريون. وisoform مطوية ومجمعة من بروتين سطح الخلية يسمى بروتين البريون الخلوي (PrPSc) هو المكون الرئيسي، إن لم يكن الوحيد، من البريونات (1). مرض كروتزفيلد جاكوب في البشر وسكرفي المجترات الصغيرة هي أطول الأمراض المعروفة في هذه المجموعة، ولكن أمراض البريون دخلت الأضواء العامة مع وباء اعتلال الدماغ الإسفنجي البقري الهائل (BSE) بدأ في عام 1986 في المملكة المتحدة، وكشف عن الإمكانات الحيوانية المنشأ من البريونات الحيوانية.

منذ بدء وباء BSE ، ازداد الاهتمام بهذه الأمراض ، واستمر الكون البريون في التوسع (2). تم تحديد العديد من أمراض البريون الجديدة – بما في ذلك مرض كروتزفيلد جاكوب المتغير ، وكشط غير نمطي (Nor98) من الأغنام ، وL – و H – من نوع L – و H – BSE – في السنوات العشرين الماضية ، وينتشر مرض التطويل المزمن بشكل كبير عبر السكان السكريفيفيفيفين في أمريكا الشمالية وتم اكتشافه مؤخرًا في النرويج (3).

وازداد القلق على الصحة العامة بشكل ملحوظ بعد أن ثبت أن مرض كروتزفيلد جاكوب المتغير ناجم عن نفس سلالة البريون المسؤولة عن أوبئة BSE (4). وبُذلت جهود لم يسبق لها مثيل لمكافحة الأوبئة في الماشية واحتواء تعرض البشر للمواد المشتقة من الماشية التي يحتمل أن تكون مصابة.

بالإضافة إلى وجود عواقب قاتلة على الحيوانات المصابة ، فإن الكشط وBSE لهما تأثير اقتصادي خطير على صناعة الثروة الحيوانية. وتجلب شركة Scrapie تعويضات اقتصادية من خلال خسارة الإنتاج، وفقدان الصادرات، وزيادة تكلفة التخلص من الجثث، والتي تمثل ما بين 10 و20 مليون دولار سنويًا في الولايات المتحدة (5). وفي المملكة المتحدة، حيث تم تشخيص مرض الـ BSE في 180,000 رأس ماشية وكان من المرجح أن يكون قد تضرر ما يصل إلى 3 ملايين، كانت التكلفة على الجمهور 5 مليارات جنيه إسترليني (7.1 مليار دولار أمريكي) (6).

يمكن أن تظهر أمراض البريون كاضطرابات متفرقة (عفوية بشكل مفترض) أو وراثية أو معدية (1). في الحيوانات، تم الإبلاغ عن اضطرابات تشبه أمراض البريون البشرية المتفرقة أو الوراثية إلا مؤخراً، مع اكتشاف كشط غير نمطي/Nor98 في المجترات الصغيرة (7) وL-و H-Type BSE في الماشية (8,9). وقد عرفت الأمراض البريون المعدية لفترة أطول بكثير، وقد وصفت في العديد من الأنواع الحيوانية. بعض الأمراض الناجمة عن انتقال العدوى عن طريق الخطأ، كما هو الحال في BSE، التي أثرت على الملايين من الماشية ولكن شملت أيضا الماعز والقطط المنزلية والرئيسيات غير البشرية، وأنواع البوفيد البرية والفلويد، على الأرجح تتغذى من المواد الملوثة من قبل عامل BSE (10). حتى تفشي اعتلال الدماغ المنمّي المنقّل المُبلغ عنه في الولايات المتحدة ومختلف البلدان الأوروبية في المنك الذي تربى في المزرعة على الأرجح نشأ من الأعلاف الملوثة بطريق الخطأ بالبريونات (10).

على الرغم من القائمة الطويلة من الأنواع الحيوانية المعرضة للخطر ، فإن أمراض البريون تُلْكِر كظروف معدية وطبيعية فقط في المجترات. يؤثر سكري على الأغنام والماعز، ويؤثر CWD على أنواع مختلفة من عائلة سيرفيداي: الغزلان البغل (Odocoileus hemionus)، الغزلان ذات الذيل الأبيض (O. virginianus)، الأيائل (Cervus canadensis)، والموظ (Alces alces alces) (11). وعلاوة على ذلك، تم مؤخرا تشخيص مرض الرنة في الرنة (رانجيفر تاراندوس) (3) والموظ (12) من النرويج.

نبلغ عن مرض البريون في الإبل الدروميدارية (Camelus dromedarius) من سكان سحري في ورقلة في جنوب شرق الجزائر، حيث لوحظ المرض في الحيوانات التي جلبت للذبح في مسلخ ورقلة. تنتشر الدرومادية على نطاق واسع في جميع أنحاء شمال وشرق أفريقيا والشرق الأوسط وجزء من آسيا، حيث تشكل وسيلة عيش لملايين الأسر التي تعيش في أكثر النظم الإيكولوجية عدائية على هذا الكوكب. ومنذ العصور القديمة، استغلت الإبل كوحوش من العبء ومصادر الحليب واللحوم وللركوب؛ اليوم ، فهي ذات أهمية هائلة كنوع من الماشية المستدامة. وخلال السنوات العشر الماضية، تطور نظام زراعة الإبل بسرعة وتحسن كثيرا (13). ويتطلب ظهور مرض بريون في الأنواع الحيوانية المستزرعة بهذه الأهمية إجراء تقييم شامل للمخاطر من أجل تنفيذ سياسات قائمة على الأدلة للسيطرة على المرض لدى الحيوانات وتقليل تعرض الإنسان إلى أدنى حد.

المواد والأساليب

عينات الحيوانات والأنسجة
 
صورة مصغرة للجمل الدرودي وجد في الصحراء بصعوبة في النهوض. في المسلخ ، أظهر الحيوان عدوانية (الركل). أصبح عصبيا عندما اضطر إلى عبور عقبة وأظهرت حركات أسفل وصعودا من طحن الرأس والأسنان. (قبل الطباعة - الفيديو متاح في العدد النهائي)

فيديو 1. الجمل الدرودي وجد في الصحراء بصعوبة في النهوض. في المسلخ ، أظهر الحيوان عدوانية (الركل). أصبح عصبيا عندما اضطر لعبور عقبة وأظهرت أسفل…

 
صورة مصغرة للجمل دروميداري ينتظر في مسلخ ورقلة للتفتيش قبل الوفاة. الحيوان يظهر حركات أسفل وصعودا من طحن الرأس والأسنان. (قبل الطباعة - الفيديو متاح في العدد النهائي)

بالفيديو 2 – ينبغي أن يكون هناك عدد من الإعلانات الجمل الدرودي ينتظر في مسلخ ورقلة للتفتيش قبل الوفاة. الحيوان يظهر حركات أسفل وصعودا من طحن الرأس والأسنان. (قبل الطباعة – الفيديو متاح في اللمسات الأخيرة…

مسلخ ورقلة هو واحد من أكبر المسالخ في حجم ذبح الماشية والجمال والمجترات الصغيرة في الجزائر. في السنوات ال 5 الماضية ، لوحظت أعراض عصبية في كثير من الأحيان في الدرومادارات البالغة في فحص ما قبل الوفاة. وتشمل علامات فقدان الوزن; تشوهات سلوكية؛ والعلامات العصبية ، مثل الهزات والعدوانية ، وفرط النشاط ، والحركات النموذجية إلى أسفل وصعودا من الرأس ، مشية مترددة وغير مؤكدة ، ترنح من الأطراف الخلفية ، والسقوط العرضي ، وصعوبة الحصول على ما يصل (فيديو 1 ؛ فيديو 1 ؛ فيديو 2).

وفقا لأوصاف المربين ، كانت المرحلة المبكرة من المرض تتميز بشكل رئيسي بعلامات سلوكية ، مثل فقدان الشهية والتهيج. عادة ما لوحظ الانفصال عن القطيع في المراعي إلى جانب العدوانية والميل إلى الركل والعض عند التعامل معها. مع تطور المرض ، أصبحت العلامات العصبية واضحة . وأظهرت الحيوانات ترنح ابالذي أدى في نهاية المطاف إلى التكومبينسي والموت.

وأفاد المربون بأن العلامات تتقدم ببطء وأن مدة المرض تراوحت بين 3 و 8 أشهر. وعلى الرغم من أنه لم يتسن حتى الآن تأريخ الحالات الأولى للمرض، فإن المعلومات التي تم جمعها من المربين وموظفي المسلخ تشير إلى أن المرض موجود منذ الثمانينات.

ويشتبه في مرض بريون في الدروماداريات جلبت إلى المسلخ على أساس علامات سريرية.

جمعنا عينات الدماغ من 3 dromedaries (لاء. 3 و 4 و 8) تظهر أعراض عصبية ومن 1 الحيوان صحية سريريا (رقم 5)، وكذلك عنق الرحم، prescapeular، والعقد الليمفاوية الأبهرية القطنية من 1 الحيوان (رقم 8). وكانت جميع الحيوانات من الإناث، وينتمون إلى السكان الصحراويين، 10 و 11 و 13 و 14 سنة على التوالي.

نحن ثابتة عينات في الشكليات لفحص النسيج والمناعة الكيميائية. كما جمعنا عينات الدماغ المجمدة من الحيوانات 4 و 8 لللطخة الغربية والتحليل الجيني وعينات من أنسجة الدماغ الرسمية الثابتة من الحيوان السليم سريريا (رقم 5). حصلنا على عينات من الدماغ من الماشية المصابة بـ BSE ومن الأغنام ARQ/ARQ، إما تتأثر بشكل طبيعي بكشط أو مصابة تجريبيا ً بـ BSE، من نظام المراقبة في إيطاليا أو من الدراسات السابقة (14).

تحليلات لطخة الأنسجة اللامنفية العصبية، والمناعية، والبارافين المدمجة

نحن جزءا لا يتجزأ من الدماغ وعينات العقدة الليمفاوية في شمع البارافين، مقطعة في 5 ميكرون، وملطخة الهيماتوسلين والإيوسين أو تخضع لتحليل لطخة الأنسجة المناعية أو جزءا لا يتجزأ من البارافين. نحن أقسام المعالجة المسبقة لكيمياء المناعة مع حمض الفورميك 98٪ لمدة 5 دقيقة، تليها الأوتوكلاف في المخزن المؤقت التسترات لمدة 5 دقيقة في 121 درجة مئوية. ثم عالجنا أقساممع 6٪ مصل الماعز العادي (ناقلات مختبرات بيرلينغامي، كاليفورنيا، الولايات المتحدة الأمريكية) في محلول المحلول المؤقت الفوسفات لمدة 60 دقيقة. قمنا بإجراء الكشف المناعي الهيستلوجي لـ PrPSc مع L42 الأجسام المضادة أحادية النسيلة (mAb) (R-Biopharm Darmstadt, ألمانيا) عند 0.01 ميكروغرام/مل في المالحة العازلة للفوسفات بين عشية وضحاها عند 4 درجات مئوية. عالجنا أقسام مع الأجسام المضادة للفأرة الحيوية الثانوية (ناقلات المختبرات)، ABC مجمع (ناقلات المختبرات) لمدة 45 دقيقة ومع diaminobenzidine (سيغما الدريتش سانت لويس، MO، الولايات المتحدة الأمريكية) لمدة 3 دقيقة. استخدمنا الهيماتوكسيلين ماير لمكافحة. ويتألف كل شوط من مقاطع التحكم الإيجابي والسلبي. قمنا بتحليل 3 أقسام من كل عينة من العقدة الليمفاوية.

جمعنا أقساما ً لللطخة المضمنة بالبارافين على أغشية نيتروسيللوز 0.45-ميكروم ممنم (شلايكر وشويل، داسيل، ألمانيا) والأغشية المجففة لمدة 24 ساعة عند 55 درجة مئوية. قمنا بإجراء علاجات الأغشية، وهضم البروتينات K (PK) (Sigma-Aldrich) (50 ميكروغرام/مل)، والكشف المناعي كما هو موضح (15). استخدمنا mAb L42 (0.01 ميكروغرام /مل) كجسم مضاد أساسي.

تحليل اللطخة الغربية

قمنا بإجراء تحليل لطخة الغربية من PrPSc من تجانس الدماغ كما هو موضح سابقا (16) وأداء التشخيص الأولي مع تركيز نهائي من PK في 50 ميكروغرام / مل. لمقارنة PrPSc dromedary مع PrPSc من أمراض الأغنام والماشية البريون ، قمنا بكتابة الجزيئية من النوى المقاومة للبروتياز (PrPres) عن طريق التنبلل المناعي التمييزي ، الذي أجري وفقًا لـ ISS (Istituto Superiore di Sanità) طريقة لطخة غربية تمييزية (17) مع تعديلات طفيفة. ويستند مبدأ التمييز على الانقسام الطرفي N التفاضلية من قبل PK (200 ميكروغرام / مل)، وكشفت باستخدام N محطة mAb مع epitope التي فقدت جزئيا بعد PK الهضم من عينات BSE (118). كمعلمة تمييزية إضافية ، نقوم بقياس النسب النسبية لأجزاء PrP diglycosylated ، monoglycosylated ، وunglycosylated d في Bbs L42.

قمنا بإزالة الجليكوزيل بإضافة 18 ميكرولتر من 0.2 متر صوديوم الفوسفات المخزن (درجة الحموضة 7.4) التي تحتوي على 0.8٪ Nonidet P40 (روش. بينزبرغ، ألمانيا) و2 ميكرولتر (80 U/mL) di N-Glycosidase F (روش) إلى 5 ميكرولتر من العينات المسخة والحضانة بين عشية وضحاها عند 37 درجة مئوية مع اهتزاز لطيف. كان mAbs المستخدم وepitope على PrP ovine على النحو التالي: L42 (148-153)، 12B2 (93-97)، SAF32 (أوكتار).

تحليل تسلسل الجينات PrP

استخرجنا الحمض النووي من 100 ملغ من أنسجة الدماغ المجمدة مع DNeasy الدم والأنسجة كيت (QIAGEN, هيلدن, ألمانيا) بعد تعليمات الشركة المصنعة. قمنا بتضخيم تسلسل ترميز جين PrP (PRNP) في حجم نهائي 50 ميكرولتر باستخدام 5 ميكرولتر من الحمض النووي المستخرج ، 1 × AmpliTaq Gold 360 PCR Buffer (الأنظمة الحيوية التطبيقية ، فوستر سيتي ، CA ، الولايات المتحدة الأمريكية) ، 2.5 ملليمول / لتر MgCl2 ، 1 × 360 GC Enhancer ، 200 ميكرومول / لتر dNTPs ، 0.25 μmol/L من الأمام (5′-GCTGACACCTTTTTTTTTAgCAG-3′) وعكس (5′-GATAAGAAATAGAAACAGGAG-3′) التمهيديات (19), و 0.5 ميكرولتر من الذهب AmpliTaq 360 (النظم الحيوية التطبيقية), وفقا لبروتوكول التضخيم التالي: 5 دقيقة في 96°C; 3 s عند 96 درجة مئوية، و1 s عند 57 درجة مئوية، و 9 s عند 72 درجة مئوية لمدة 40 دورة، و4 دقيقة عند 72 درجة مئوية.

قمنا بتنقية الأمبلوبك باستخدام مجموعة تنظيف Illustra ExoProStar 1-Step (GE Healthcare Life Sciences Little Chalfont, UK). أجرينا ردود فعل التسلسل باستخدام BigDye المنهي v1.1 دورة تسلسل كيت، تنقية باستخدام بيج دايت XTerminator تنقية كيت، والكشف عن مع جهاز ABI PRISM 3130 (جميع الأنظمة الحيوية التطبيقية). قمنا بتحليل التسلسلات باستخدام Seq Scape الإصدار 2.5 (الأنظمة الحيوية التطبيقية).

أعلى

نتائج

 
الصورة المصغرة من تلطيخ الهيماتوكسيلين والإيوين (A, B), الكيمياء المناعية (Câ€"O), وتحليل لطخة الأنسجة جزءا لا يتجزأ من البارافين (Pâ€s) من أدمغة الإبل الدروميدية جلبت للذبح إلى مسلخ ورقلة, الجزائر, 2015 â €2016. تغيير الإسفنجية من neuropil، الدبقية، وفقدان الخلايا العصبية في المهاد (A) وvacuolation داخل الخلايا العصبية في المهور (B) (شريط مقياس = 50 Î1/4m). الكيمياء المناعية لبروتين البريون (PrPSc) مع L42 جسم مضاد أحادي النسيلة يدل على ترسب متشابك / دقيق كثيف في المهاد (C)

الشكل 1 – ما إذا كانت هناك نسبة تلطيخ الهيماتوكسيلين والإيوين (A, B), الكيمياء المناعية (C-O), وتحليل لطخة الأنسجة جزءا لا يتجزأ من البارافين (P-S) من أدمغة الإبل الدروميدية جلبت للذبح إلى مسلخ ورقلة, الجزائر, 2015-2016. تغيير الإسفنجية من…

أظهر الفحص النسيجي علم الأمراض تغير ًا في علم الأسفنجية ، وأصل الدبقي ، وفقدان الخلايا العصبية في العديد من مناطق الدماغ للحيوانات ذات الأعراض الثلاثة (الشكل 1 ، الألواح A ، B) ولكن ليس في الدرودية عديمة الأعراض. لاحظنا vacuoles بشكل تفضيلي في neuropil (الشكل 1، لوحة A) ولكن أيضا في كثير من الأحيان تنطوي على الهيئات العصبية (الشكل 1، لوحة B). ونادرا ً ما لوحظت الفاكووليس المخروطية. هذه التغيرات العصبية تحدث باستمرار في المسألة الرمادية من مناطق الدماغ تحت القشرية، مثل الترميد، المهاد (الشكل 1، لوحة A)، منتصف الدماغ، والدوامات (الشكل 1، لوحة B) من جميع الحيوانات 3. نادراً ما تأثرت المادة البيضاء. لاحظنا تذبذب معتدل في النخاع oblongata، ولا سيما في نواة الدهليزية والقلة. كانت نواة الجهاز الانفرادي والنواة تحت اللمعان أقل تأثرًا. لم تظهر النخاع العنقي، المتاحة فقط للالحيوانات 8، أي تغييرات إسفنجية. مناطق الدماغ القشرية كانت تشارك بشكل مختلف. وأظهرت الحيوانات 3 و 8 vacuolation مشتتة في cingulate، بيريفورم، والقشريات الأمامية. وعلى النقيض من ذلك، تأثرت القشريات الدماغية بشكل أكبر في الحيوان 4. تم جمع المخيخ من الحيوانات 4 و 8 ، ولوحظت الفاكولفقط في الطبقة الجزيئية من الحيوان 4.

من خلال التحليل المناعي الكيميائي ، اكتشفنا PrPSc في الدماغ من جميع الدرومادارات الأعراض. وعموماً، لوحظ دائماً ترسب PrPSc في مناطق الدماغ التي بها انحطاط إسفنجي (الشكل 1، الألواح C، D). وبالإضافة إلى ذلك، شملت رواسب PrPSc أيضاً مناطق أقل تأثراً أو لا تتأثر بالإسفنج، مثل نواة السبيل الانفرادي (الشكل 1، الفريق هاء)؛ نواة نقص الكبلوبل؛ الخلايا الهرمية من قرن آمون. الطبقة الحبيبية من المخيخ، بما في ذلك خلايا بوركيني (الشكل 1، اللوحة F)؛ والعديد من مناطق المادة البيضاء.

اختلفت أنماط ترسب PrPSc التي تنطوي على neuropil والخلايا العصبية وغليا. وشملت الأنماط متشابك / punctate (الشكل 1 ، لوحة G) ، داخل الخلايا العصبية (الشكل 1 ، لوحة H) ، perineuronal والخطية (الشكل 1 ، لوحة الأول) ، داخل جلي (الشكل 1 ، لوحات J – L) ، والأوعية الدموية (الشكل 1 ، لوحة M). في المهور وoblongata النخاعي ، لاحظنا في كثير من الأحيان نمطًا غير نمطي داخل الخلايا (الشكل 1 ، اللوحة N) الذي ملأ فيه PrPSc السيتوبلازم بأكمله. كان PrPSc غائبًا في دماغ الدرودية عديمة الأعراض (الشكل 1 ، اللوحة O). تم اكتشاف ترسب PrPSc البارز المقاوم للبروتياز بسهولة بواسطة لطخة جزءا لا يتجزأ من البارافين في نفس مناطق الدماغ وجدت إيجابية من خلال التحليل المناعي الكيميائي ، مثل الطبقات العميقة من القشريات (الشكل 1 ، لوحة P) ، والطبقة الهرمية والفيبريا من قرن آمون (الشكل 1 ، لوحة Q) ، والطبقة الحبيبية من المخيخ والمادة البيضاء المرتبطة بها (الشكل 1 ، لوحة R) ، والمادة الرمادية من البون (الشكل 1) ، لوحة S).

 
صورة مصغرة من بروتين بريون المناعة في المركز الانباتي للبصيلات اللمفاوية من عنق الرحم (A) وprescapeular (B) الغدد الليمفاوية من الجمل الدرودي رقم 8، مسلخ ورقلة، الجزائر. يبدو أن بنية الغدد الليمفاوية معرضة للخطر بشكل معتدل بسبب التجميد الجزئي للعينات التي حدثت بطريق الخطأ قبل التثبيت. أشرطة مقياس = 50 Î1/4m. Inset في لوحة A: تكبير أعلى يظهر مركز الإنبات ملحوظ مع النجمة؛ شريط مقياس = 25 ملم.

الشكل 2 – ما إذا كانت هناك نسبة بريون البروتين المناعة في مركز الانبات من بصيلات اللمفاوية من عنق الرحم (A) وprescapeular (B) الغدد الليمفاوية من الجمل الدرودي رقم 8، مسلخ ورقلة، الجزائر. بنية الغدد الليمفاوية…

اكتشفنا رواسب PrPSc في العقد الليمفاوية الأبهرية العنقية، وprescapeular، والقطني من الحيوان 8 (الشكل 2) التي تنطوي على >80٪ من بصيلات الأولية والثانوية في 3 أقسام تحليلها. تتكون رواسب PrPSc من شبكة شبكية في مركز بصيلات اللمفاوية ، والتي تنوعت في كثافة تلطيخ ، مصحوبة بحبيبات دقيقة إلى حبيبات خشنة من PrPSc في السيتوبلازم من الخلايا غير اللمفاوية داخل المسام. لاحظنا أيضًا وضع علامات مناعية إضافية محببة أو داخل الخلايا في المناطق المنفّتة.

 
الصورة المصغرة لتحليل لطخة الغربية من بروتين البريون dromedary (PrPSc). أ) تحليل لطخة الغربية من proteinase K (PK) "تعامل PrPSc في تجانس الدماغ من الإبل الدرودية مع أعراض عصبية (#4 #8)، مسلخ ورقلة، الجزائر. تم تحميل عينة من خردة الأغنام كتحكم (يشار إلى C +). تم فحص الأغشية مع L42 (يسار) و 12B2 الأجسام المضادة أحادية النسيلة (mAb) (يمين). يشار إلى الأوزان الجزيئية (kDa) على اليسار. كانت مكافئات الأنسجة المحملة لكل حارة 2 ملغ لعينة الإبل

الشكل 3 – ما إذا كانت هناك نسبة تحليل لطخة الغربية من بروتين البريون الدرودي (PrPSc). أ) تحليل لطخة الغربية من proteinase K (PK) – PrPSc المعالجة في تجانس الدماغ من الإبل الدرودية مع أعراض عصبية (#4 #8) ، مسلخ ورقلة,…

كشف تحليل لطخة الغربية من تجانس الدماغ من dromedaries 4 و 8 PrPSc مع PrPres تظهر الشخصية الكهروفورية الكلاسيكية، التي تتميز 3 عصابات رئيسية تمثل diglycosylated، monoglycosylated، وprPres unglycosylated لشكل 3، لوحة A). وبناء على ذلك، تم حل النطاقات 3 في نطاق واحد من 18 كيلو دا بعد deglycosylation الأنزيمية (الشكل 3، لوحة B).

كان الوزن الجزيئي الظاهر لـ PrPres من كلا الحيوانين أعلى قليلاً من الكشط الكلاسيكي وأعلى بوضوح من BSE والأغنام التي تم تمريرها BSE (الشكل 3 ، الألواح A ، C ، الجانب الأيسر). دفعتنا هذه النتيجة إلى التحقيق في N terminal PK-cleavage تحت ظروف PK الصارمة عن طريق التنبولين المناعي التمييزي ، والذي يتيح التمييز الجزيئي لسلالات TSE المجترة الأكثر شيوعًا من BSE الكلاسيكية (118،20). أظهر رسم خرائط Epitope لـ PrPres أن الوزن الجزيئي الظاهر الأعلى في PrPres الدرودي يعكس موقع شق محطة N أكثر من BSEs وعينات الكشط. في الواقع ، عند العلاج مع PK ، حافظت prPres dromedary على محطة N 12B2 و SAF32 mAb epitopes ، في حين فقدت الكشط الكلاسيكي epitope SAF32 mAb مع الحفاظ على epitope mAb 12B2 ، وفقدت عينات BSE كلا epitopes ، كونها سلبية مع SAF32 و 12B2 mAbs (الشكل 3 ، C). لقد أظهرنا في السابق أنه مع وصمة عار الغربية التمييزية ISS ، يتميز كل من BSE وscrapie بنمط PrPres المهيمن di-glycosylated ، على الرغم من أن BSE أكثر glycosylated من الكشط (18). تؤكد بياناتنا هذا الاختلاف وتظهر أن مرض بريون الجمل (CPD) هو أكثر من ذلك أقل glycosylated من الكشط الكلاسيكي ، كونه يتميز بPrPres المهيمنة أحادية الجليكوزيل (رقم التذييل[PDF – 185 KB – 1 page] الفني). تسلسل كشف نفس التسلسل PRNP في الحيوانات 4 و 8 (GenBank الانضمام ل. MF990558-9) التي أظهرت بدورها هوية nt 100٪ مع تسلسل PRNP المبلغ عنها بالفعل للجمال الدرودي (19).

وبالتوازي مع التحاليل المختبرية، أجرينا تحقيقاً استعادياً للعلامات العصبية في الدروماديين في مسلخ ورقلة. أظهر 20 من 937 من الحيوانات في عام 2015 و51 من أصل 1322 في عام 2016 العلامات العصبية الموصوفة سابقًا (الجدول)؛ وكان معدل الانتشار الإجمالي 3.1٪ في الدروماداريات جلبت للذبح. جميع الحيوانات المذبوحة مشتقة من المنطقة المحيطة بورقلة، ولم يلاحظ المرض إلا في الحيوانات >8 سنوات من العمر.

 

أعلى

مناقشة

نحن نصف مرض بريون في الإبل الدرودية، التي تم تصنيفها باسم CPD، التي اكتشفناها أثناء الفحص الروتيني قبل الوفاة في مسلخ ورقلة في الجزائر. وأشار التحليل الاستعادي إلى انتشار الحيوانات بنسبة 3.1٪ مع علامات عصبية توحي بالمرض في الدروماداريات التي جلبت للذبح. ويبدو أن هذا الرقم يمكن الاعتماد عليه بالنظر إلى أن الشكوك السريرية تأكدت في جميع الحيوانات الـ 3 التي تخضع للتحليل المختبري. ومع ذلك ، لأن أمراض البريون تتميز بفترات حضانة طويلة والعمر الذي يصبح فيه المرض واضحًا (>8 سنوات) أكثر تقدمًا من العمر الذي يتم فيه ذبح معظم الدروماديين (<5 years), the prevalence found in the older animals is probably higher than the actual prevalence (excluding younger animals).

طيف الأنواع الحيوانية المعرضة لمرض البريون كبير. ومع ذلك، فإن أمراض البريون لا تُعامل كحالات معدية وطبيعية الحدوث إلا في المجترات التي تنتمي إلى أسر بوفيداي وسيرفيداي. Dromedaries ليست المجترات (رومينانتيا suborder) ولكن بدلا من ذلك هي Tylopoda ، وهو ترتيب فرعي من Artiodactyla ، والتي تشمل أيضا الجمل 2 سنام (Camelus bactrianus) ، البرية باتريان الجمل (C. فيروس) ، لاما (لاما غلاما) ، الألبكة (فيكوكنا باكوس) ، وvicuñas (V. vicugna) (21). وجود مرض البريون في الدروماتيريات يوسع نطاق الأنواع الحيوانية المعرضة بشكل طبيعي لأمراض البريون إلى تصنيف مختلف عن تلك المعروفة بالفعل ويفتح مجالات بحثية جديدة على البيئة والعلاقة المضيفة ومسببات الأمراض من أمراض البريون.

إن مسألة ما إذا كان مرض CPD مرضاً معدياً في الظروف الطبيعية هو سؤال رئيسي. في الكشط وCWD ، حيث تشارك الأنسجة اللمفاوية على نطاق واسع ، يكون الانتقال الأفقي في الظروف الطبيعية فعالًا. وعلى النقيض من ذلك، عندما لا تشارك الأنسجة اللمفاوية المحيطية بشكل كبير، كما هو الحال في الأبقار BSE، غير نمطية / Nor98 كشط، ومعظم الأمراض البريون البشرية، انتقال أفقي يبدو أن تكون غير فعالة. ويفسر عدم الكفاءة هذا عادة بافتراض نشر PrPSc في حالة حيوية على الأطراف كشرط مسبق لتسهيل إلقاء البريون في البيئة (22). على الرغم من أننا حصلنا على عينات من أحد الحيوانات الواحدة، فإن اكتشافنا لـ PrPSc في جميع الغدد الليمفاوية المتاحة يشير إلى وجود مراضة عصبية وفيرة، وإلى جانب الانتشار الملحوظ للحالات السريرية في المسلخ، يتفق على اقتراح الطبيعة المعدية لـ CPD. وتشير هذه الملاحظات أيضا إلى أن المرض له بداية مكتسبة بدلا من أن تكون تلقائية.

أصل CPD غير معروف. قد يكون مرضًا فريدًا من نوعه للدروميدارات أو مرضًا نابعًا من انتقال مرض بريون من نوع آخر. ومن الجدير بالذكر أنه تم تصدير وجبة اللحوم والعظام من المملكة المتحدة في جميع أنحاء العالم، وبعد حظر تغذية الحيوانات بالبروتين المجترات في عام 1988، ارتفعت الصادرات إلى العالم الثالث إلى 000 30 طن (23 طنا) في عام 1991. وبالتالي، لا يمكن استبعاد إمكانية وصول الأعلاف المصابة بفيروس BSE إلى شمال أفريقيا. ومع ذلك، حتى لو لم يتم تقييم خطر الإصابة بـ BSE بشكل رسمي في الجزائر وعدم وجود نظام مراقبة رسمي لأمراض البريون الحيوانية، فمن غير المرجح أن يظهر BSE في الدروماداريات دون أدلة في تجمعات الماشية. وعلاوة على ذلك، يتم رفع في الغالب dromedaries مع أي استخدام من feedstuff. وأخيراً، فإن التوقيع الكيميائي الحيوي PrPSc في CPD يختلف بوضوح عن التوقيع على BSE أو BSE التي عبرها الأغنام. على الرغم من أن العوامل المضيفة معروفة لتكون قادرة على تغيير توقيع PrPSc أثناء انتقال العدوى بين الأنواع ، فقد تم الحفاظ على ملف BSE بشكل عام في الأنواع المتأثرة عن طريق الخطأ أو تجريبيًا. من حيث المبدأ ، قد يكون CPD أيضا مستمدة من scrapie. وغالبا ما يتم تربية الدروماداريات جنبا إلى جنب مع الأغنام والماعز، وتقاسم المراعي المشتركة. ومع ذلك، وعلى الرغم من أن عدم وجود نظام مراقبة فعال يمنع من التوصل إلى أي استنتاج، لم يتم الإبلاغ عن الكشط في الجزائر، ولم يتمكن مسح ميداني في شمال شرق الجزائر من تقديم أدلة على المرض (24). وعلاوة على ذلك، اختلف توقيع PrPSc من CPD عن حالة الكشط الكلاسيكية المستخدمة للمقارنة (الشكل 3). للمساهمة في توضيح أصل وطبيعة CPD ، تجري الفحوصات الحيوية في لوحة من نماذج القوارض لتوصيف سلالة بريون شاملة.

 
صورة مصغرة من الجمال الدرودية جمع والكسح مقالب النفايات في الصحراء بالقرب من مصنع لاستخراج النفط. (قبل الطباعة - الفيديو متاح في العدد النهائي)

فيديو 3. الجمال الدرودية تجمع وتنظف مقالب النفايات في الصحراء بالقرب من مصنع لاستخراج النفط. (قبل الطباعة – الفيديو متاح في العدد النهائي)

وستساعد التحقيقات المقبلة في التوزيع الجغرافي لوثائق البرنامج القطري على توضيح مصدره. وإذا اقتصر المرض على السكان الدروديين في منطقة ورقلة، يمكن افتراض حدوث انتقال محلي. وحدثت أوبئة سكرية شائعة المصدر في الأغنام والماعز في المملكة المتحدة وإيطاليا نتيجة لاستخدام اللقاحات الملوثة بطريق الخطأ (26.25). ومع ذلك، في منطقة ورقلة، لم يتم تنفيذ أي برنامج تطعيم للوقاية من الأمراض المعدية في الدروماداريات. ومن المثير للاهتمام أن مربين الدروميداريين يشيران إلى أن المصدر الغذائي الوحيد غير المراعي المتاحة للدروميدارات في منطقة ورقلة هو مقالب النفايات المنتشرة على نطاق واسع في الصحراء بالقرب من مصانع استخراج النفط، حيث تتجمع الدروماريوات والمجترات الصغيرة وتمسحها (فيديو 3). وينبغي النظر في إمكانية أن يكون الدروماداريون قد اكتسبوا المرض من تناول النفايات الملوثة بالبريون.

تتبع أصل أمراض البريون أمر صعب. وفي حالة وثيقة البرنامج القطري، تمثل ممارسات الرعاة التقليدية الواسعة النطاق والبدوية للدروميدارات عاملاً هائلاً للتعجيل بانتشار المرض لمسافات طويلة، مما يجعل من الصعب تحديد مسار انتشاره. وأخيراً، ينبغي التحقيق في التدفقات الرئيسية لواردات الحيوانات الحية إلى الجزائر من النيجر ومالي وموريتانيا (27) لتتبع المصدر المحتمل لوثائق البرنامج القطري من بلدان أخرى.

الإبل هي نوع من الحيوانات الحيوية لملايين الأشخاص على الصعيد العالمي. يبلغ معدل النمو السنوي لسكان الهجن في العالم 2.1٪ (28). في عام 2014، قُدِّر عدد السكان بـ 28 مليون شخص، ولكن من المحتمل أن يتم التقليل من هذا العدد. ويوجد ما يقرب من 88 في المائة من الإبل في أفريقيا، ولا سيما شرق أفريقيا، ويوجد 12 في المائة منها في آسيا. أفادت بيانات رسمية عن سقوط 350 ألف دروميدي في الجزائر في عام 2014 (28).

وعلى أساس الصفات النفية والمعايير الاجتماعية الجغرافية، اقتُرح وجود العديد من السكان الدروديين في الجزائر (29). ومع ذلك، تشير الدراسات الجينية الحديثة في الجزائر ومصر إلى ضعف التمييز بين السكان الدروديين نتيجة للاستخدام التاريخي كوحش من العبء عبر القارات على طول طرق القوافل عبر الصحراء الكبرى، إلى جانب ممارسات القطيع التقليدية واسعة النطاق/البدوية (30).

ويمكن أن ينعكس هذا التجانس الوراثي أيضا في PRNP. ولذلك فإن الدراسات المتعلقة بتقلب PRNP في الإبل لها ما يبررها لاستكشاف وجود أنواع جينية مقاومة لوثيقة البرنامج القطري، والتي يمكن أن تمثل أداة هامة لإدارة CPD كما هو الحال بالنسبة لبرامج تربية الكشط في الأغنام.

وفي السنوات العشر الماضية، تغير نظام زراعة الإبل بسرعة، مع تزايد إنشاء مزارع الألبان ومصانع الألبان في المناطق المحيطة بالمناطق وتنويع منتجات الإبل وتغلغل الأسواق (13). ويتطلب هذا التطور تحسين المعايير الصحية للأمراض المعدية، وفي ضوء برنامج الحماية الصحية الشاملة، للأمراض البريونية.

وظهور مرض آخر من البريون في أنواع الحيوانات ذات الأهمية الحاسمة لملايين الأشخاص في جميع أنحاء العالم يجعل من الضروري تقييم المخاطر التي يتعرض لها البشر ووضع سياسات قائمة على الأدلة للسيطرة على انتشار المرض في الحيوانات والحد منه وتقليل التعرض البشري إلى أدنى حد. وسيكون تنفيذ نظام لمراقبة أمراض البريون خطوة أولى للتمكين من مكافحة الأمراض وتقليل التعرض البشري والحيواني إلى أدنى حد ممكن. وأخيرا، يلزم تحسين القدرة التشخيصية لأمراض البريون في جميع البلدان الأفريقية حيث تشكل الدروماداريات جزءا من الثروة الحيوانية المحلية.

أعلى

 

الدكتور بابل حاج طبيب بيطري يعمل في مدرسة "عادي ونوبيري ورجلة" وفي مختبر حماية النظم الإيكولوجية في المناطق القاحلة وشبه القاحلة، جامعة كاسمي مرباح ورقلة، الجزائر. وتشمل اهتماماته البحثية الرئيسية دراسة الأمراض المعدية والأداء التقني للحيوانات الداهية للدروميداريات.

أعلى

 

اعتراف

نشكر ألفريدو كاجيانو على الدعم على تحرير الفيديو.

 

 

المصدر والمراجع : https://wwwnc.cdc.gov/eid/article/24/6/17-2007_article

 

Qvetech.com

Open chat
1
Need help?
Hello
Can we help you?